Isolement et caractérisation de composés allélopathiques par chromatographie sur colonne et collecteur de fractions LAMBDA OMNICOLL

Isolement, élucidation structurale et synthèse chimique de composés allélopathiques L'étude des plantes, des champignons et autres micro-organismes est un travail fastidieux et chronophage. Cependant, l'identification de structures biologiques hautement efficaces (utilisés comme herbicides naturels, médicaments, antioxydants, etc.) Cela vaut la peine d'y consacrer du temps et des efforts.

Une étude de routine sur l'analyse structurale allélochimique devient difficile lorsque les structures ne sont pas identifiées dans l'extrait brut, même après plusieurs étapes préliminaires visant à fractionner les extraits bruts. (par macération, extractions assistées par ultrasons ou micro-ondes suivies d'extractions aqueuses biphasiques, etc.).

Le chercheur se retrouvera alors avec un grand volume de solvant pouvant contenir un mélange partiel de structures (avec ou sans activités biologiques similaires). Activité biologique les structures peuvent être identifiées par les étude et analyses bioguidées. Ce grand volume de solvant doit être divisé en fractions plus petites à l'aide de mélanges de solvants. polarités différentes. Le fractionnement permettra d'isoler les molécules allélopathiques les plus actives pour l'activité biologique souhaitée/ciblée.

La plupart du temps, le chromatographie liquide sur colonne de gel de silice est utilisé pour le fractionnement des extraits. Cependant, il est courant de fractionner et de recueillir les éluats d'environ 65 - 200 fractions, afin de réaliser structure bioactive la plus purifiée sur chaque éluat. La collecte manuelle d'un grand nombre de fractions est la phase la plus chronophage et la plus laborieuse du projet de recherche général, en raison du coût élevé des collecteurs de fractions spectrophotométriques disponibles sur le marché.

Les étapes de purification supplémentaires comprennent chromatographie sur couche mince, essais bioactifs, chromatographies préparatives sur colonne etc. et enfin, une liste de dosages spectrométriques pour les structures hautement actives, afin d'élucider et de réaliser leur synthèse chimique à l'avenir.

Le Le traitement automatisé de 200 fractions ou plus est facilement réalisable. de la manière la plus réalisable (si le bon collecteur de fractions est choisi !).

Fractionnement de l'extrait brut

Initialement, les extraits bruts sont séparés en différentes fractions distinctes contenant des composés de polarités ou de tailles moléculaires similaires par le chromatographie sur colonne. Dans cette séparation chromatographique, environ 65 fractions mesurant chacune 20 mL ont été collectées (basé sur le temps) par le collecteur de fractions OMNICOLL.

Chromatographie sur couche mince (CCM)

Une aliquote de toutes les fractions collectées a été déposée sur des plaques CCM de gel de silice activé (20 x 20 cm). Les fractions ont été regroupées en fonction de motif de taches et valeurs Rf sur la plaque CCM. Les fractions regroupées ont été numérotées (Fr.1 - Fr.8).

Chromatographie sur colonne préparative TLC ou HPLC

Les fractions (Fr.1 - Fr.8) peuvent être purifiées davantage par chromatographie préparative sur colonne TLC et/ou HPLC. La chromatographie liquide préparative à haute performance (HPLC) permet d'isoler un composé particulier avec une plus grande précision.

Caractérisation des composés allélopathiques

Les fractions pures isolées sont ensuite utilisées pour la détermination de la structure et également pour vérifier une nouvelle fois l'activité biologique.

La caractérisation des composés allélopathiques purs est réalisée par haute résolution IR, MS, ¹Main ¹³RMN du carbone 13 spectres.

Les spectres IR permettent d'identifier les groupes fonctionnels de la fraction pure isolée. La LC-MS fournit la masse moléculaire empirique ou exacte (HRMS), et les spectres RMN révèlent l'environnement des atomes de carbone et d'hydrogène. L'analyse LC-MS facilite la comparaison des spectres de masse.