Isolamento e caracterização de compostos alelopáticos por cromatografia em coluna e coletor de frações LAMBDA OMNICOLL

Isolamento, elucidação estrutural e síntese química de compostos alelopáticos. A identificação de estruturas biológicas altamente potentes a partir de plantas, fungos e outros microrganismos é um estudo extremamente trabalhoso e demorado. No entanto, essa identificação representa um avanço significativo. (utilizados como herbicidas naturais, medicamentos, antioxidantes, etc.) Vale a pena o tempo e o esforço investidos.

Um estudo de rotina sobre a análise estrutural de aleloquímicos torna-se difícil quando as estruturas não são identificadas no extrato bruto, mesmo após várias etapas preliminares para realizar o fracionamento dos extratos brutos. (por maceração, extração assistida por ultrassom ou micro-ondas, seguida de extração aquosa bifásica, etc.).

O pesquisador ficará então com um grande volume de solvente que pode conter uma mistura parcial de estruturas. (com ou sem atividades biológicas semelhantes). Atividade biológica das estruturas podem ser identificadas por estudo e ensaios bioguiados. Este grande volume de solvente deve ser dividido em frações menores usando misturas de solventes com polaridades diferentes. A coleta de frações ajudará a isolar as moléculas alelopáticas mais ativas para a atividade biológica desejada/alvo.

Na maioria das vezes, o cromatografia em coluna líquida de gel de sílica é utilizado para o fracionamento dos extratos. No entanto, é comum fracionar e coletar eluatos de cerca de 65 - 200 frações, a fim de alcançar o estrutura bioativa mais purificada em cada eluato. A coleta manual de um grande número de frações é a fase que consome mais tempo e esforço em um projeto de pesquisa geral, devido ao alto custo dos coletores de frações espectrofotométricos disponíveis no mercado.

Etapas adicionais de purificação incluem Cromatografia em camada fina, ensaios bioativos, cromatografias preparativas em coluna etc. e, finalmente, uma lista de ensaios espectrométricos para as estruturas altamente ativas, a fim de elucidar e viabilizar sua síntese química no futuro.

O A coleta de 200 frações ou mais pode ser facilmente automatizada. da maneira mais viável (se o adequado) coletor de frações é escolhido!).

Fracionamento do extrato bruto

Inicialmente, os extratos brutos são separados em várias frações discretas contendo compostos de polaridades ou tamanhos moleculares semelhantes por meio de cromatografia em coluna. Nessa separação cromatográfica, aproximadamente Foram coletadas 65 frações de 20 mL cada. (com base no tempo) pelo coletor de frações ÔNICO.

Cromatografia em camada fina (CCF)

Uma alíquota de todas as frações coletadas foi aplicada em placas de cromatografia em camada fina (CCF) de sílica gel ativada (20 x 20 cm). As frações foram agrupadas com base em padrão de manchas e valores de Rf na placa de TLC. As frações agrupadas foram numeradas (Fr.1 - Fr.8).

Cromatografia preparativa em coluna TLC ou HPLC

As frações (Fr.1 - Fr.8) podem ser purificadas posteriormente por cromatografia preparativa em coluna TLC e/ou HPLC. A HPLC preparativa ajudará a isolar um composto específico com maior precisão.

Caracterização dos compostos alelopáticos

As frações puras isoladas são então utilizadas para a determinação da estrutura e também para verificar mais uma vez a atividade biológica.

A caracterização dos compostos alelopáticos puros é feita por alta resolução. IR, MS, ¹Mão ¹³RMN de 13C espectros.

Os espectros de infravermelho são usados para identificar os grupos funcionais da fração pura isolada. A LC-MS fornece a massa molecular, seja empírica ou exata (HRMS), e os espectros de RMN revelam os ambientes de carbono e hidrogênio. A análise por LC-MS auxilia na comparação dos padrões de massa.