컬럼 크로마토그래피 및 분획 수집기 LAMBDA OMNICOLL을 이용한 타감작용 화합물의 분리 및 특성 분석

타감작용 화합물의 분리, 구조 규명 및 화학적 합성 식물, 균류 및 기타 미생물로부터 화합물을 추출하는 연구는 매우 힘들고 시간이 많이 소요되는 작업입니다. 하지만, 효능이 뛰어난 생물학적 구조를 규명하는 것은 매우 중요한 의미를 지닙니다. (천연 제초제, 의약품, 항산화제 등으로 사용됨) 시간과 노력을 들일 만한 가치가 있습니다.

조추출물의 분획을 위한 여러 예비 단계를 거쳤음에도 불구하고 조추출물에서 구조가 확인되지 않으면, 알렐로화학적 구조 분석에 대한 일반적인 연구는 어려워집니다. (침지, 초음파 또는 마이크로파 보조 추출 후 수성 2상 추출 등을 통해).

그러면 연구자는 여러 구조가 부분적으로 혼합된 형태를 포함할 수 있는 다량의 용매와 함께 남게 됩니다. (유사한 생물학적 활성이 있거나 없거나). 생물학적 활성 이러한 구조들은 다음과 같은 특징으로 식별될 수 있습니다. 생물학적 유도 연구 및 분석. 이처럼 많은 양의 용매는 용매 혼합물을 사용하여 더 적은 양으로 나누어야 합니다. 서로 다른 극성. 분획 수집은 원하는/목표 생물학적 활성에 가장 효과적인 타감작용 분자를 분리하는 데 도움이 될 것입니다.

대부분, 실리카겔 액체 컬럼 크로마토그래피 추출물을 분획하는 데 사용됩니다. 그러나 일반적으로 약 100ml 정도의 용출액을 분획하고 수집합니다. 65~200 분수, 이를 달성하기 위해 각 용출액에서 가장 정제된 생리활성 구조. 대량의 분획물을 수동으로 수집하는 것은 시중에 판매되는 분광광도계 분획 수집기의 높은 가격 때문에 일반적인 연구 프로젝트에서 가장 시간과 노력이 많이 드는 단계입니다.

추가 정제 단계는 다음과 같습니다. 박층 크로마토그래피, 생물 활성 분석, 분취용 컬럼 크로마토그래피 등등, 그리고 마지막으로 목록입니다. 분광 분석법 높은 활성을 보이는 구조의 경우, 향후 화학적 합성을 규명하고 실현하기 위해 연구가 필요합니다.

그만큼 200개 이상의 분수를 수집하는 작업은 쉽게 자동화할 수 있습니다. 가장 실현 가능한 방식으로 (적절한 경우) 분획 수집기 선택되었습니다!).

조추출물의 분획

초기에 조추출물은 유사한 극성 또는 분자 크기를 갖는 화합물을 포함하는 다양한 개별 분획으로 분리됩니다. 컬럼 크로마토그래피. 이 크로마토그래피 분리에서, 대략 각각 20mL씩 65개의 분획을 수집했습니다. (시간 기반) ~에 의해 분획 수집기 옴니콜.

박층 크로마토그래피(TLC)

수집된 모든 분획물의 일부를 활성 실리카겔 TLC 플레이트(20 x 20 cm)에 로딩했습니다. 분획물들은 다음 기준에 따라 합쳤습니다. 반점 패턴 및 Rf 값 TLC 플레이트에서, 합쳐진 분획물들은 번호가 매겨졌다(Fr.1 - Fr.8).

분리용 박막 크로마토그래피(TLC) 또는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 컬럼 크로마토그래피

분획물(Fr.1 - Fr.8)은 다음과 같은 방법으로 추가 정제할 수 있습니다. 분리용 박막 크로마토그래피(TLC) 및/또는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 컬럼 크로마토그래피. 분취용 HPLC는 특정 화합물을 더욱 정확하게 분리하는 데 도움이 됩니다.

타감작용 화합물의 특성 규명

이렇게 분리된 순수 분획물은 구조 결정 및 생물학적 활성 확인을 위해 사용됩니다.

순수 타감작용 화합물의 특성 분석은 고해상도 분광법을 통해 수행됩니다. 적외선, 질량 분석, ¹손 ¹³13C NMR 스펙트럼.

IR 스펙트럼은 분리된 순수 분획의 작용기를 확인하는 데 사용됩니다. LC-MS는 실험적 분자량 또는 정확한 분자량(HRMS)을 제공하며, NMR 스펙트럼은 탄소와 수소의 환경을 나타냅니다. LC-MS 분석은 MS 패턴을 비교하는 데 도움이 됩니다.