Kolon kromatografisi ve fraksiyon toplayıcı LAMBDA OMNICOLL ile allelopatik bileşiklerin izolasyonu ve karakterizasyonu

Allelopatik bileşiklerin izolasyonu, yapısal aydınlatılması ve kimyasal sentezi Bitkilerden, mantarlardan ve diğer mikroorganizmalardan elde edilen yüksek potansiyelli biyolojik yapıların belirlenmesi oldukça emek yoğun ve zaman alıcı çalışmalardır. Bununla birlikte, yüksek potansiyelli biyolojik yapıların tanımlanması (Doğal herbisit, ilaç, antioksidan vb. olarak kullanılır.) Harcanan zaman ve emeğe değer.

Ham özütlerin fraksiyonlanması için çeşitli ön adımlar atıldıktan sonra bile, ham özütte yapılar tanımlanamadığında, allelokimyasal yapısal analiz üzerine rutin bir çalışma zorlaşır. (Maserasyon, ultrason veya mikrodalga destekli ekstraksiyonlar ve ardından sulu iki fazlı ekstraksiyonlar vb. yöntemlerle).

Araştırmacı daha sonra, kısmen farklı yapıların karışımını içerebilen büyük miktarda çözücü ile baş başa kalacaktır. (benzer biyolojik aktivitelere sahip olsun veya olmasın). Biyolojik aktivite Yapıların bazıları aşağıdaki yöntemlerle tanımlanabilir: biyolojik yönlendirmeli çalışma ve analizler. Bu büyük miktardaki çözücü, çözücü karışımları kullanılarak daha küçük parçalara ayrılmalıdır. farklı kutupluluklar. Fraksiyon toplama işlemi, istenen/hedeflenen biyolojik aktivite için en aktif allelopatik molekülleri izole etmeye yardımcı olacaktır.

Çoğunlukla, silika jel sıvı kolon kromatografisi Ekstraktların fraksiyonlanması için kullanılır. Bununla birlikte, genellikle yaklaşık olarak fraksiyonlama yapılır ve elüatlar toplanır. 65 - 200 kesir, elde etmek için her bir elüattaki en saf biyoaktif yapı. Piyasada bulunan spektrofotometrik fraksiyon toplayıcılarının yüksek maliyeti nedeniyle, çok sayıda fraksiyonun manuel olarak toplanması, genel araştırma projesindeki en zaman ve emek yoğun aşamadır.

Daha ileri arıtma adımları şunları içerir: ince tabaka kromatografisi, biyoaktif analizler, hazırlayıcı kolon kromatografileri vb. ve son olarak, bir liste spektrometrik analizler Gelecekte kimyasal sentezini aydınlatmak ve gerçekleştirmek amacıyla, yüksek aktiviteye sahip yapılar üzerinde çalışılmaktadır.

O 200 veya daha fazla kesirden oluşan koleksiyon kolayca otomatikleştirilebilir. en uygun şekilde (eğer uygunsa) kesir toplayıcı (seçildi!).

Ham özütün fraksiyonlanması

Başlangıçta ham özütler, benzer polariteye veya moleküler boyuta sahip bileşikler içeren çeşitli ayrı fraksiyonlara ayrılır. kolon kromatografisi. Bu kromatografik ayırmada, yaklaşık olarak Her biri 20 mL hacminde 65 fraksiyon toplandı. (zamana bağlı olarak) tarafından kesir toplayıcı OMNICOLL.

İnce tabaka kromatografisi (TLC)

Toplanan tüm fraksiyonların bir kısmı, aktifleştirilmiş silika jel TLC plakalarına (20 x 20 cm) yüklendi. Fraksiyonlar, aşağıdaki kriterlere göre birleştirildi: beneklenme deseni ve Rf değerleri TLC plakası üzerinde. Birleştirilen fraksiyonlar numaralandırıldı (Fr.1 - Fr.8).

Hazırlayıcı TLC veya HPLC kolon kromatografisi

Fraksiyonlar (Fr.1 - Fr.8) aşağıdaki yöntemlerle daha da saflaştırılabilir: hazırlayıcı TLC ve/veya HPLC kolon kromatografisi. Hazırlayıcı HPLC, belirli bir bileşiğin daha doğru bir şekilde izole edilmesine yardımcı olacaktır.

Allelopatik bileşiklerin karakterizasyonu

Elde edilen saf fraksiyonlar daha sonra yapı tayini ve biyolojik aktivitenin tekrar kontrol edilmesi için kullanılır.

Saf allelopatik bileşiklerin karakterizasyonu yüksek çözünürlüklü yöntemlerle yapılır. IR, MS, ¹El ¹³C NMR spektrumlar.

İzole edilen saf fraksiyonun fonksiyonel gruplarını belirlemek için IR spektrumları kullanılır. LC-MS, deneysel veya kesin (HRMS) moleküler ağırlığı verirken, NMR spektrumları C ve H ortamlarını ortaya çıkarır. LC-MS analizi, MS desenini karşılaştırmaya yardımcı olur.