Izolace a charakterizace alelopatických látek pomocí sloupcové chromatografie a sběrače frakcí LAMBDA OMNICOLL

Izolace, objasnění struktury a chemická syntéza alelopatických sloučenin z rostlin, hub a dalších mikroorganismů jsou velmi pracné a časově náročné studie. Identifikace vysoce účinných biologických struktur (používaných jako přírodní herbicidy, léčiva, antioxidanty atd.) však stojí za tento vynaložený čas a úsilí.

Rutinní studie alelochemické strukturní analýzy se stává obtížnou, pokud nejsou v surovém extraktu identifikovány struktury ani po několika předběžných krocích k dosažení frakcionace surových extraktů (macerací, ultrazvukovou nebo mikrovlnnou extrakcí a následnou dvoufázovou vodnou extrakcí, atd.)

Výzkumníkovi pak zůstane velký objem rozpouštědla, který může obsahovat částečnou směs struktur (s podobnou biologickou aktivitou nebo bez ní). Biologickou aktivitu struktur lze identifikovat pomocí bio-guided studie a testů. Tento velký objem rozpouštědla by měl být rozdělen na menší frakce pomocí směsí rozpouštědel s různou polaritou. To pomůže izolovat nejaktivnější alelopatické molekuly pro požadovanou/cílovou biologickou aktivitu.

K frakcionaci extraktů se většinou používá sloupcová chromatografie na silikagelu. Běžně se však frakcionuje a sbírá eluát z přibližně 65 - 200 frakcí, aby se dosáhlo co nejčistší bioaktivní struktury v každém eluátu. Ruční sběr velkého počtu frakcí je časově a pracovně nejnáročnější fází ve výzkumném projektu, a to díky vysoké ceně spektrofotometrických sběračů frakcí na trhu.

Další kroky purifikace zahrnují chromatografii na tenké vrstvě, bioaktivní testy, preparativní sloupcovou chromatografii atd. a nakonec seznam spektrometrických testů pro vysoce aktivní struktury, za účelem objasnění a dosažení jejich chemické syntézy.

Sběr 200 a více frakcí však lze snadno automatizovat tím nejvhodnějším způsobem (pokud je zvolen vhodný sběrač frakcí!).

LAMBDA Laboratory Instruments, 20. července 2023