カラムクロマトグラフィーと分画コレクターLAMBDA OMNICOLLによるアレロパシー化合物の単離と特性解析

アレロパシー化合物の単離、構造解析および化学合成 植物、菌類、その他の微生物からの高活性物質の同定は、非常に労力と時間を要する研究である。しかし、高活性生物構造の同定は、 （天然除草剤、医薬品、抗酸化剤などとして使用される） それに費やした時間と労力に見合う価値がある。.

粗抽出物の分画を行うためのいくつかの予備的ステップを踏んだ後でも、粗抽出物中に構造が同定されない場合、アレルケミカル構造解析に関するルーチン研究は困難になる。 （浸漬抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出に続いて水性二相抽出を行うなど）.

研究者はその後、構造の一部混合物を含む可能性のある大量の溶媒を手元に残すことになる。 （類似の生物学的活性の有無にかかわらず）. 生物活性 構造物のうち、 生物誘導型研究およびアッセイ. この大量の溶媒は、以下の溶媒混合物を使用してより小さな分量に分割する必要があります。 異なる極性. 分画収集は、目的とする生物学的活性に対して最も活性の高いアレロパシー分子を分離するのに役立ちます。.

ほとんどの場合、 シリカゲル液体カラムクロマトグラフィー 抽出物の分画に使用されます。ただし、約 65～200の分数, 達成するために 各溶出液中の最も精製された生物活性構造. 市販の分光光度計分画収集装置のコストが高いため、多数の分画を手作業で収集することは、一般的な研究プロジェクトにおいて最も時間と労力を要する段階である。.

さらなる精製ステップには以下が含まれる 薄層クロマトグラフィー、生物活性アッセイ、分取カラムクロマトグラフィー など、最後に、 分光分析法 高活性構造については、将来的にその化学合成を解明し実現するために研究を行う。.

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粗抽出物の分画

まず、粗抽出物は、極性や分子サイズが類似した化合物を含むさまざまな個別の画分に分離されます。 カラムクロマトグラフィー. このクロマトグラフィー分離では、約 20 mLずつの65個の分画が採取された。 （時間ベース） 分画収集業者 オムニコル。.

薄層クロマトグラフィー（TLC）

収集したすべての分画のアリコートを活性化シリカゲルTLCプレート（20 x 20 cm）にロードした。分画は、 斑点パターンとRf値 TLCプレート上で、プールした分画に番号を付けた（Fr.1～Fr.8）。.

分取TLCまたはHPLCカラムクロマトグラフィー

分画（Fr.1～Fr.8）はさらに精製することができる。 分取TLCおよび／またはHPLCカラムクロマトグラフィー. 分取HPLCは、特定の化合物をより正確に分離するのに役立ちます。.

アレロパシー化合物の特性評価

分離された純粋な画分は、構造決定に用いられるとともに、生物活性を再度確認するためにも使用される。.

純粋なアレロパシー化合物の特性評価は高解像度で行われる IR、MS、, ¹手 ¹³13C NMR スペクトル。.

IRスペクトルは、単離された純粋な画分の官能基を知るために用いられる。LC-MSは経験的分子量または正確な分子量（HRMS）を示し、NMRスペクトルはCおよびH環境を明らかにする。LC-MS分析はMSパターンを比較するのに役立つ。.