Inseldurchblutung: Automatisierte Mehrkanal-Fraktionssammlung mit LAMBDA OMNICOLL

Langerhans-Inseln spielen vermutlich eine Schlüsselrolle in der Pathophysiologie von Typ-1- und Typ-2-Diabetes aufgrund der Unfähigkeit der Insel-β-Zellen, ausreichend Insulin zur Regulierung des Blutzuckerspiegels auszuschütten.

Das endgültige Maß für die Qualität der β-Zellen in einer Insel ist die Messung der β-Zellfunktion, d. h. die Fähigkeit der Inseln, Insulin kontrolliert als Reaktion auf kleinste Veränderungen des umgebenden Glukosespiegels freizusetzen.

Die Nutzung von Perifusionssystemen zum Verständnis der β-Zellkinetik in vitro war ein Schlüsselfaktor für die Aufklärung der Physiologie und Pathophysiologie der Inselzellen. Die Inselzell-Perifusion umfasst die Exposition der Inselzellen gegenüber einem kontinuierlichen Fluss von Nährstoffen, Gas oder Reagenzien. Mehrere Forscher veröffentlichten Perifusionssysteme mit Kontrolle über Temperatur, pH-Wert und Durchflussrate des Perifusats.

Derzeit gibt es kein standardisiertes, kostengünstiges Gerät und kein Protokoll, das sich in jedem Labor problemlos reproduzieren lässt.

Der Einrichtung zur Inselzell-Perifusion besteht aus vier Perifusionssäulen angeschlossen an vier Kanal-Isamtec-Pumpen, um gleichzeitig vier verschiedene Perifusionslösungen in vier parallele, Inselzellen enthaltende Säulen zu pumpen. Durchflussrate von 100 µL/min. Die kontinuierliche oder dynamische Perfusion der Lösung, die Glucose und Sekretagoga enthält, durch die Inselzellen ist die genaueste Methode zur Beurteilung der regulierten Insulinfreisetzung in vitro.

Mit dem automatisierten Mehrkanal-Fraktionssammler LAMBDA OMNICOLL können beliebige Peristaltikpumpen von Drittanbietern mit analogen Signalen verwendet werden. 

Die Säulen, die die Inselzellen und das Perifusionsmedium enthielten, wurden bei 37 °C gehalten. in einer temperaturkontrollierten Kammer. Die Inseln wurden pro Stimulus 10 – 15 min lang perfundiert, um eine ausreichende Exposition der Inseln und die Sammlung ihrer Sekretionsprodukte zu ermöglichen.

Perifusate (100 μL/min) aus 4 Säulen wurden gleichzeitig jede Minute mit einem automatisierten System aufgefangen. 4-Kanal-Fraktionssammler LAMBDA OMNICOLL in 96-Well-Platten. Der LAMBDA OMNICOLL 4-Kanal-Probensammler wählt jede Minute die obersten 4 Vertiefungen der 96-Well-Platte aus. (A, B, C und D – jede dieser Bezeichnungen steht für eine andere Behandlungsbedingung) Sammle 12 Minuten lang Brüche und gehe dann zu den unteren vier Zeilen über. (Zeilen E, F, G und H) der 96-Well-Platte.

Das Perifusat in den Sammelplatten mit 96 Vertiefungen wurde bei <4 °C gehalten, um die Integrität der Analyten zu erhalten.

Die Mehrkanal-Fraktionssammlerbasen von LAMBDA OMNICOLL (die die Perifusatproben enthalten) können in ein Kaltbad oder einen anderen temperaturstabilisierten Behälter gestellt werden.

Die gesammelten Proben des Perifusates wurden untersucht auf Insulin-, Glucagon- oder Somatostatinkonzentration. Die Messung der verschiedenen Hormone kann in verschiedenen Vertiefungen derselben 96-Well-Platte erfolgen.
Prinzipiell 96 Proben von Präparationen mehrerer Inseln Durch die gleichzeitige Messung verschiedener experimenteller Bedingungen wird ein Hochdurchsatz-Screening ermöglicht.

Automatisierte Mehrkanal-Fraktionssammlung mit LAMBDA OMNICOLL, konfiguriert für 96-Well-Platten

Für 96-Well-Platten, weiter automatisierte Mehrkanal-LAMBDA-OMNICOLL-Fraktionssammler wurde angepasst:

NEU! Konfigurationsversion 2022
Beispiel: Kundenspezifischer 6-Kanal-Fraktionssammler LAMBDA OMNICOLL für 96-Well-Platten.

Weitere Beispiele:

Bruchsammlung mit 4 Kanäle in 96-Well-Platten zur Inselperfusion

Kundenspezifischer LAMBDA OMNICOLL Mehrkanal-Autosampler mit 2 gleichzeitige Ströme und zwei LAMBDA-Pumpen