PERIFÚZIA OSTROVČEKOV: Automatizovaný viackanálový zber frakcií s LAMBDA OMNICOLL

Pankreatické ostrovčeky Predpokladá sa, že zohrávajú kľúčovú úlohu v patofyziológii Diabetes 1. a 2. typu kvôli neschopnosti β-buniek ostrovčekov vylučovať dostatočné množstvo inzulínu na reguláciu hladiny glukózy v krvi.

Definitívnym meradlom kvality β-buniek v ostrovčekoch je meranie funkcie β-buniek, t. j. schopnosti ostrovčekov kontrolovane uvoľňovať inzulín v reakcii na nepatrné zmeny hladín glukózy v okolí.

Využitie perfúznych systémov na pochopenie kinetiky β-buniek in vitro bolo kľúčovým faktorom pri objasňovaní fyziológie a patofyziológie ostrovčekov. Perifúzia ostrovčekov zahŕňa vystavenie ostrovčekov nepretržitému toku živín, plynu alebo činidiel. Niekoľko výskumníkov publikovalo perfuzívne systémy s reguláciou teploty, pH a prietoku perifuzátu.

V súčasnosti neexistuje štandardizovaný, lacný prístroj a protokol, ktorý by sa dal ľahko replikovať v akomkoľvek laboratóriu.

Ten/Tá/To nastavenie perfúzie ostrovčekov pozostáva z štyri perfuzívne kolóny pripojené k štvorkanálovým pumpám Isamtec, na pumpovanie 4 rôznych perifúznych roztokov do 4 paralelných kolón obsahujúcich ostrovčeky súčasne s prietok 100 µl/min. Kontinuálny tok alebo dynamická perfúzia roztoku obsahujúceho glukózu a sekretagogy cez ostrovčeky je najpresnejším hodnotením regulovaného uvoľňovania inzulínu in vitro.

Automatizovaný viackanálový zberač frakcií LAMBDA OMNICOLL umožňuje použitie akýchkoľvek peristaltických čerpadiel tretích strán s analógovými signálmi. 

Kolóny s ostrovčekmi a perifúznym médiom sa udržiavali pri teplote 37 °C. v komore s kontrolovanou teplotou. Ostrovčeky boli perifundované 10 – 15 minút na stimul, aby sa umožnila ich správna expozícia a zhromaždenie ich sekrečného produktu.

Perifuzáty (100 μl/min) zo 4 kolón boli odoberané súčasne každú minútu automatizovaným 4-kanálový zberač frakcií LAMBDA OMNICOLL do 96-jamkových platní. 4-kanálový zberač vzoriek LAMBDA OMNICOLL vyberá každú minútu 4 najvrchnejšie jamky 96-jamkovej platne. (A, B, C a D – každý predstavuje iný liečebný stav) zhromaždiť 12 minút zlomkov a potom prejsť do spodných štyroch riadkov (Riadky E, F, G a H) 96-jamkovej platne.

Perifuzát v zberných 96-jamkových platniach sa uchovával pri teplote <4 °C, aby sa zachovala integrita analytov.

Viackanálové základne zberačov frakcií LAMBDA OMNICOLL (obsahujúce vzorky perifuzátu) sa môžu umiestniť do studeného kúpeľa alebo akejkoľvek inej termostabilizovanej nádoby.

Odobraté vzorky perifuzátu boli testované na koncentrácia inzulínu, glukagónu alebo somatostatínu. Meranie rôznych hormónov sa môže vykonať v rôznych jamkách tej istej 96-jamkovej platne.
V zásade 96 vzoriek z prípravy viacerých ostrovčekov s rôznymi experimentálnymi podmienkami je možné merať súčasne, čo umožňuje vysokovýkonný skríning.

Automatizovaný viackanálový zber frakcií s LAMBDA OMNICOLL konfigurovaným pre 96-jamkové platne

Pre 96-jamkové platne, ďalej automatizované viackanálové zberače frakcií LAMBDA OMNICOLL prispôsobené:

NOVINKA! Konfiguračná verzia 2022
Príklad: Prispôsobený 6-kanálový zberač frakcií LAMBDA OMNICOLL pre 96-jamkové platne.

Ďalšie príklady:

Zber zlomkov s 4 kanály do 96-jamkových platní na perfúziu ostrovčekov

Prispôsobený viackanálový automatický vzorkovač LAMBDA OMNICOLL s 2 simultánne streamy a dve LAMBDA čerpadlá