PERIFUSÃO DE ILHOTAS: Coleta automatizada de frações multicanal com LAMBDA OMNICOLL

Ilhotas pancreáticas Acredita-se que desempenhem um papel fundamental na fisiopatologia de Diabetes tipo 1 e tipo 2 devido à incapacidade das células β das ilhotas pancreáticas de secretarem insulina em quantidade suficiente para regular a glicemia.

A medida definitiva da qualidade das células β em uma ilhota é a medição da função das células β, ou seja, a capacidade das ilhotas de liberar insulina de forma controlada em resposta a mínimas alterações nos níveis de glicose no ambiente.

A utilização de sistemas de perfusão para compreender a cinética das células β in vitro tem sido um fator chave na elucidação da fisiologia e fisiopatologia das ilhotas pancreáticas. A perfusão das ilhotas envolve a Exposição das ilhotas a um fluxo contínuo de nutrientes, gases ou reagentes.. Diversos pesquisadores publicaram sistemas de perfusão com controle de temperatura, pH e taxa de fluxo do perfusato.

Atualmente, não existe um aparato e protocolo padronizados e de baixo custo que possam ser replicados facilmente em qualquer laboratório.

O Configuração da perfusão das ilhotas consiste em quatro colunas de perfusão conectado a quatro bombas Isamtec de canal único, para bombear 4 soluções de perfusão diferentes em 4 colunas paralelas contendo ilhotas simultaneamente com o vazão de 100 µL/min. O fluxo contínuo ou a perfusão dinâmica da solução contendo glicose e secretagogos através das ilhotas é a avaliação mais precisa da liberação regulada de insulina in vitro.

É possível utilizar qualquer bomba peristáltica de terceiros com sinais analógicos através do coletor de frações multicanal automatizado LAMBDA OMNICOLL. 

As colunas contendo as ilhotas e o meio de perfusão foram mantidas a 37 °C. em uma câmara com temperatura controlada. As ilhotas foram perfundidas durante 10 a 15 minutos por estímulo para permitir a exposição adequada das ilhotas e a coleta de seu produto de secreção.

Os perfusatos (100 μL/min) de 4 colunas foram coletados simultaneamente a cada minuto por um sistema automatizado. Coletor de frações de 4 canais LAMBDA OMNICOLL em placas de 96 poços. O coletor de amostras LAMBDA OMNICOLL de 4 canais seleciona os 4 poços superiores da placa de 96 poços a cada minuto. (A, B, C e D - cada uma representando uma condição de tratamento diferente) Para coletar 12 minutos de frações e depois passar para as quatro linhas inferiores. (Linhas E, F, G e H) da placa de 96 poços.

O meio de perfusão nas placas de coleta de 96 poços foi mantido a uma temperatura inferior a 4 °C para preservar a integridade dos analitos.

As bases do coletor de frações multicanal LAMBDA OMNICOLL (contendo as amostras de perfusato) podem ser colocadas em banho-maria frio ou em qualquer outro recipiente termoestabilizado.

As amostras coletadas do perifuso foram analisadas para concentração de insulina, glucagon ou somatostatina. A medição dos diferentes hormônios pode ser feita em diferentes poços da mesma placa de 96 poços.
Em princípio, 96 amostras de preparações de múltiplas ilhotas Diferentes condições experimentais podem ser medidas simultaneamente, permitindo uma triagem de alto rendimento.

Coleta automatizada de frações multicanal com LAMBDA OMNICOLL configurada para placas de 96 poços.

Para placas de 96 poços, além disso coletores de frações LAMBDA OMNICOLL automatizados multicanal foi personalizado:

NOVO! Versão de configuração 2022
Exemplo: Coletor de frações LAMBDA OMNICOLL personalizado de 6 canais para placas de 96 poços.

Outros exemplos:

Coleção de frações com 4 canais em placas de 96 poços para perfusão de ilhotas

Amostrador automático multicanal LAMBDA OMNICOLL personalizado com 2 fluxos simultâneos e duas bombas LAMBDA