PERIFUSIÓN DE ISLOTES: Recolección automatizada de fracciones multicanal con LAMBDA OMNICOLL

Islotes pancreáticos Se cree que desempeñan un papel clave en la fisiopatología de Diabetes tipo 1 y tipo 2 debido a que las células β de los islotes no secretan cantidades suficientes de insulina para regular la glucosa en sangre.

La medida definitiva de la calidad de las células β en un islote es la medición de la función de las células β, es decir, la capacidad de los islotes para liberar insulina de manera controlada en respuesta a cambios mínimos en los niveles de glucosa ambiental.

La utilización de sistemas de perfusión para comprender la cinética de las células β in vitro ha sido un factor clave en la elucidación de la fisiología y fisiopatología de los islotes. La perfusión de los islotes implica la exposición de los islotes a un flujo continuo de nutrientes, gases o reactivos. Varios investigadores han publicado sistemas de perfusión con control de temperatura, pH y caudal del líquido de perfusión.

Actualmente no existe ningún aparato ni protocolo estandarizado y económico que pueda replicarse fácilmente en cualquier laboratorio.

El Configuración de la perfusión de los islotes consta de cuatro columnas de perfusión conectado a bombas Isamtec de cuatro canales, para bombear 4 soluciones de perfusión diferentes a 4 columnas paralelas que contienen islotes simultáneamente con el caudal de 100 µL/min. El flujo continuo o la perfusión dinámica de la solución que contiene glucosa y secretagogos a través de los islotes es la evaluación más precisa de la liberación regulada de insulina in vitro.

Es posible utilizar cualquier bomba peristáltica de terceros con señales analógicas mediante el colector de fracciones multicanal automatizado LAMBDA OMNICOLL. 

Las columnas que contenían los islotes y el medio de perfusión se mantuvieron a 37 °C. en una cámara con temperatura controlada. Los islotes se perfundieron durante 10-15 minutos por estímulo para permitir una exposición adecuada de los islotes y la recolección de su producto de secreción.

Los perfusados (100 μL/min) de 4 columnas se recolectaron simultáneamente cada minuto mediante un sistema automatizado. Colector de fracciones de 4 canales LAMBDA OMNICOLL en placas de 96 pocillos. El colector de muestras de 4 canales LAMBDA OMNICOLL selecciona los 4 pocillos superiores de la placa de 96 pocillos cada minuto. (A, B, C y D: cada una representa una condición de tratamiento diferente) para recopilar 12 minutos de fracciones y luego pasar a las cuatro filas inferiores (Filas E, F, G y H) de la placa de 96 pocillos.

El líquido de perfusión en las placas de recolección de 96 pocillos se mantuvo a <4 °C para preservar la integridad de los analitos.

Las bases colectoras de fracciones multicanal LAMBDA OMNICOLL (que contienen las muestras de perfusado) se pueden colocar en un baño frío o en cualquier otro recipiente termoestabilizado.

Las muestras recolectadas del perfusado fueron analizadas para concentración de insulina, glucagón o somatostatina. La medición de las diferentes hormonas se puede realizar en diferentes pocillos de la misma placa de 96 pocillos.
En principio, 96 muestras de preparaciones de islotes múltiples Se pueden realizar mediciones simultáneas en diferentes condiciones experimentales, lo que permite un cribado de alto rendimiento.

Recolección automatizada de fracciones multicanal con LAMBDA OMNICOLL configurada para placas de 96 pocillos.

Para placas de 96 pocillos, además Colectores de fracciones multicanal automatizados LAMBDA OMNICOLL se personalizó:

¡NUEVO! Versión de configuración 2022
Ejemplo: Colector de fracciones LAMBDA OMNICOLL de 6 canales personalizado para placas de 96 pocillos.

Otros ejemplos:

Colección de fracciones con 4 canales en placas de 96 pocillos para la perfusión de islotes

Muestreador automático multicanal LAMBDA OMNICOLL personalizado con 2 flujos simultáneos y dos bombas LAMBDA