PERIFUZE OSTRŮVKŮ: Automatizovaný vícekanálový sběr frakcí pomocí LAMBDA OMNICOLL

Pankreatické ostrůvky se předpokládá, že hrají klíčovou roli v patofyziologii Diabetes 1. a 2. typu kvůli neschopnosti β-buněk ostrůvků vylučovat dostatečné množství inzulínu k regulaci hladiny glukózy v krvi.

Definitivní mírou kvality β-buněk v ostrůvcích je měření funkce β-buněk, tj. schopnosti ostrůvků kontrolovaně uvolňovat inzulín v reakci na nepatrné změny hladiny glukózy v okolí.

Využití perfuzních systémů k pochopení kinetiky β-buněk in vitro bylo klíčovým faktorem pro objasnění fyziologie a patofyziologie ostrůvků. Perifúze ostrůvků zahrnuje vystavení ostrůvků nepřetržitému toku živin, plynu nebo činidel. Několik výzkumníků publikovalo perfuzní systémy s regulací teploty, pH a průtoku perifuzátu.

V současné době neexistuje standardizovaný, levný přístroj a protokol, který by bylo možné snadno replikovat v jakékoli laboratoři.

Ten/Ta/To nastavení perfuze ostrůvků se skládá z čtyři perfuzní kolony připojeno ke čtyřkanálovým pumpám Isamtec, pro současné čerpání 4 různých perfuzních roztoků do 4 paralelních kolon obsahujících ostrůvky s průtok 100 µl/min. Kontinuální tok nebo dynamická perfuze roztoku obsahujícího glukózu a sekretagogy skrz ostrůvky je nejpřesnějším způsobem hodnocení regulovaného uvolňování inzulínu in vitro.

Automatizovaný vícekanálový sběrač frakcí LAMBDA OMNICOLL umožňuje použití peristaltických čerpadel třetích stran s analogovými signály. 

Kolony s ostrůvky a perfuzním médiem byly udržovány při teplotě 37 °C. v komoře s řízenou teplotou. Ostrůvky byly perfuzovány po dobu 10–15 minut na stimul, aby se umožnila jejich správná expozice a sběr jejich sekrečních produktů.

Perifuzáty (100 μL/min) ze 4 kolon byly odebírány současně každou minutu automatizovaným 4kanálový sběrač frakcí LAMBDA OMNICOLL do 96jamkových destiček. Čtyřkanálový sběrač vzorků LAMBDA OMNICOLL každou minutu vybírá 4 horní jamky 96jamkové destičky. (A, B, C a D – každý představuje jiný léčebný stav) shromáždit 12 minut zlomků a poté se přesunout do spodních čtyř řádků (Řady E, F, G a H) 96jamkové destičky.

Perifuzát ve sběrných 96jamkových destičkách byl uchováván při teplotě <4 °C, aby se zachovala integrita analytů.

Vícekanálové základny sběračů frakcí LAMBDA OMNICOLL (obsahující vzorky perifuzátu) lze umístit do studené lázně nebo jakékoli jiné termostabilizované nádoby.

Odebrané vzorky perifuzátu byly testovány na koncentrace inzulinu, glukagonu nebo somatostatinu. Měření různých hormonů lze provádět v různých jamkách stejné 96jamkové destičky.
V principu 96 vzorků z přípravy více ostrůvků s různými experimentálními podmínkami lze měřit současně, což umožňuje vysoce výkonný screening.

Automatizovaný vícekanálový sběr frakcí s LAMBDA OMNICOLL konfigurovaným pro 96jamkové destičky

Pro 96jamkové destičky dále automatizované vícekanálové sběrače frakcí LAMBDA OMNICOLL přizpůsobil/a:

NOVINKA! Konfigurační verze 2022
Příklad: Zakázkový 6kanálový sběrač frakcí LAMBDA OMNICOLL pro 96jamkové destičky.

Další příklady:

Sběr zlomků s 4 kanály do 96jamkových destiček pro perfuzi ostrůvků

Přizpůsobený vícekanálový automatický vzorkovač LAMBDA OMNICOLL s 2 simultánní streamy a dvě LAMBDA čerpadla