Périfusion d'îlots avec collecteur de fractions automatisé – LAMBDA OMNICOLL

Ces îlots pancréatiques jouent probablement un rôle clé dans la physiopathologie des Diabète de type 1 et de type 2 en raison de l'incapacité des cellules β des îlots à sécréter des quantités suffisantes d'insuline pour réguler la glycémie.

La mesure de la qualité des cellules β dans un îlot est la détermination de la fonction des cellules β, c'est-à-dire la capacité des îlots à libérer de l'insuline de manière contrôlée en réponse à de minuscules variations des niveaux de glucose ambiant.

L'utilisation de systèmes de perfusion pour comprendre la cinétique des cellules β in vitro a été un facteur clé dans l'élucidation de la physiologie et de la physiopathologie des îlots de Langerhans. La perfusion des îlots implique une exposition des îlots à un flux continu de nutriments, de gaz ou de réactifs. Plusieurs chercheurs ont publié des systèmes de périfusion permettant de contrôler la température, le pH et le débit du perfusat.

Il n'existe actuellement aucun appareil ni protocole standardisé et peu coûteux qui puisse être facilement reproduit dans n'importe quel laboratoire.

Le dispositif de perfusion des îlots se compose de quatre colonnes de perfusion reliées à une pompes Ismatec à 4 canaux, pour pomper simultanément 4 solutions de perfusion différentes dans 4 colonnes contenant des îlots à un débit de 100 µL/min. La perfusion continue ou dynamique de la solution contenant du glucose et des sécrétagogues à travers les îlots constitue l'évaluation la plus précise de la libération régulée d'insuline in vitro.

Il est possible d'utiliser n'importe quelle pompe péristaltique tierce disposant d'entrées digitales avec le collecteur de fractions multicanaux automatisé LAMBDA OMNICOLL.

$Perfusion d'îlots avec collecteur de fractions automatisé Omnicoll dans des plaques à 96 puits$

Les colonnes contenant les îlots et le milieu de perfusion ont été maintenues à 37 °C. dans une chambre à température contrôlée. Les îlots ont été perfusés pendant 10 à 15 minutes par stimulus afin de permettre une exposition adéquate des îlots et la collecte de leur produit de sécrétion.

Les perfusats (100 μL/min) de 4 colonnes ont été collectés simultanément toutes les minutes par un collecteur de fractions à 4 canaux LAMBDA OMNICOLL dans des plaques à 96 puits. Le collecteur d'échantillons LAMBDA OMNICOLL à 4 canaux se déplace dans les 4 puits supérieurs de la plaque à 96 puits toutes les minutes (A, B, C et D - chacun représentant une condition de traitement différente) puis après 12 minutes de collecte il passe aux quatre rangées suivantes (lignes E, F, G et H) de la plaque à 96 puits.

Le perfusat dans les plaques de collecte à 96 puits a été maintenu à <4 °C pour préserver l'intégrité des analytes.

Les bases de collecteurs de fractions multicanaux LAMBDA OMNICOLL (contenant les échantillons de perfusat) peuvent être placées dans un bain froid ou dans tout autre récipient thermostaté.

Les échantillons prélevés du liquide de perfusion ont été analysés pour connaître la concentration d'insuline, de glucagon ou de somatostatine. Le dosage des différentes hormones peut être effectué dans différents puits d'une même plaque à 96 puits.
En principe, 96 échantillons provenant de préparations d'îlots multiples obtenues dans différentes conditions expérimentales peuvent être mesurées simultanément, ce qui permet un criblage à haut débit.

PÉRIFUSION DES ÎLOTS : Collecte automatisée de fractions avec l' OMNICOLL de LAMBDA multicanaux

ILOTS PANCRÉATIQUES

PERFUSION DES ILOTS

Collecte automatisée de fractions multicanaux avec LAMBDA OMNICOLL configurée pour les plaques à 96 puits