PÉRIFUSION DES ÎLOTS : Collecte automatisée de fractions multicanaux avec LAMBDA OMNICOLL

Îlots pancréatiques on pense qu'ils jouent un rôle clé dans la physiopathologie de Diabète de type 1 et de type 2 en raison de l'incapacité des cellules β des îlots à sécréter des quantités suffisantes d'insuline pour réguler la glycémie.

La mesure définitive de la qualité des cellules β dans un îlot est la mesure de la fonction des cellules β, c'est-à-dire la capacité des îlots à libérer de l'insuline de manière contrôlée en réponse à de minuscules variations des niveaux de glucose ambiant.

L'utilisation de systèmes de périfusion pour comprendre la cinétique des cellules β in vitro a été un facteur clé dans l'élucidation de la physiologie et de la physiopathologie des îlots de Langerhans. La périfusion des îlots implique… exposition des îlots à un flux continu de nutriments, de gaz ou de réactifs. Plusieurs chercheurs ont publié des systèmes de périfusion permettant de contrôler la température, le pH et le débit du périfusat.

Il n'existe actuellement aucun appareil ni protocole standardisé et peu coûteux qui puisse être facilement reproduit dans n'importe quel laboratoire.

Le dispositif de périfusion d'îlots se compose de quatre colonnes de périfusion relié à quatre pompes Isamtec à canaux, pour pomper simultanément 4 solutions de périfusion différentes dans 4 colonnes parallèles contenant des îlots. débit de 100 µL/min. La perfusion continue ou dynamique de la solution contenant du glucose et des sécrétagogues à travers les îlots constitue l'évaluation la plus précise de la libération régulée d'insuline in vitro.

Il est possible d'utiliser n'importe quelle pompe péristaltique tierce avec des signaux analogiques grâce au collecteur de fractions multicanaux automatisé LAMBDA OMNICOLL. 

Les colonnes contenant les îlots et le milieu de périfusion ont été maintenues à 37 °C. dans une chambre à température contrôlée. Les îlots ont été perfusés pendant 10 à 15 minutes par stimulus afin de permettre une exposition adéquate des îlots et la collecte de leur produit de sécrétion.

Les perfusats (100 μL/min) de 4 colonnes ont été collectés simultanément toutes les minutes par un système automatisé. Collecteur de fractions à 4 canaux LAMBDA OMNICOLL dans des plaques à 96 puits. Le collecteur d'échantillons LAMBDA OMNICOLL à 4 canaux sélectionne les 4 puits supérieurs de la plaque à 96 puits toutes les minutes. (A, B, C et D - chacun représentant une condition de traitement différente) pour collecter 12 minutes de fractions puis passer aux quatre rangées du bas (Lignes E, F, G et H) de la plaque à 96 puits.

Le perfusat dans les plaques de collecte à 96 puits a été maintenu à <4 °C pour préserver l'intégrité des analytes.

Les bases de collecteurs de fractions multicanaux LAMBDA OMNICOLL (contenant les échantillons de perfusat) peuvent être placées dans un bain froid ou dans tout autre récipient thermostabilisé.

Les échantillons prélevés du liquide de perfusion ont été analysés pour concentration d'insuline, de glucagon ou de somatostatine. Le dosage des différentes hormones peut être effectué dans différents puits d'une même plaque à 96 puits.
En principe, 96 échantillons provenant de préparations d'îlots multiples Il est possible de mesurer simultanément différentes conditions expérimentales, ce qui permet un criblage à haut débit.

Collecte automatisée de fractions multicanaux avec LAMBDA OMNICOLL configurée pour les plaques à 96 puits

Pour les plaques à 96 puits, en outre collecteurs de fractions LAMBDA OMNICOLL multicanaux automatisés personnalisé :

NOUVEAU ! Configuration Version 2022
Exemple: Collecteur de fractions LAMBDA OMNICOLL personnalisé à 6 canaux pour plaques 96 puits.

Autres exemples :

Collection de fractions avec 4 canaux dans des plaques à 96 puits pour la perfusion d'îlots

Échantillonneur automatique multicanal LAMBDA OMNICOLL personnalisé avec 2 flux simultanés et deux pompes LAMBDA