Выделение и характеристика аллелопатических соединений методом колоночной хроматографии и сбора фракций LAMBDA OMNICOLL

Выделение, установление структуры и химический синтез аллелопатических соединений. Исследования, направленные на выявление высокоэффективных биологических структур в растениях, грибах и других микроорганизмах, являются очень трудоемкими и занимают много времени. Однако идентификация таких структур позволяет выявлять высокоэффективные биологические структуры. (используются в качестве природных гербицидов, лекарственных средств, антиоксидантов и т. д.) Это стоит затраченных времени и усилий.

Проведение рутинного исследования аллелохимической структуры становится затруднительным, если структуры не идентифицируются в неочищенном экстракте даже после нескольких предварительных этапов фракционирования неочищенных экстрактов. (путем мацерации, экстракции с помощью ультразвука или микроволнового излучения с последующей двухфазной экстракцией в водной среде и т. д.).

Затем исследователь останется с большим объемом растворителя, который может содержать частичную смесь структур. (с аналогичной биологической активностью или без нее). Биологическая активность структуры можно идентифицировать по Биоориентированные исследования и анализы. Этот большой объем растворителя следует разделить на более мелкие фракции, используя смеси растворителей с разные полярности. Сбор фракций поможет выделить наиболее активные аллелопатические молекулы, обладающие желаемой/целевой биологической активностью.

В основном, жидкостная хроматография на силикагеле Используется для фракционирования экстрактов. Однако обычно фракционируют и собирают элюаты объемом около 65 - 200 фракций, для достижения наиболее очищенная биоактивная структура в каждом элюате. Ручной сбор большого количества фракций является наиболее трудоемким и затратным по времени этапом в общем исследовательском проекте из-за высокой стоимости спектрофотометрических устройств для сбора фракций, представленных на рынке.

Дальнейшие этапы очистки включают в себя тонкослойная хроматография, анализы биоактивных веществ, препаративная колоночная хроматография и т. д., и наконец, список спектрометрические анализы для высокоактивных структур, с целью выяснения их структуры и осуществления химического синтеза в будущем.

Он Сбор 200 и более фракций можно легко автоматизировать. наиболее осуществимым способом (если надлежащий коллектор фракций выбран!).

Фракционирование неочищенного экстракта

Первоначально неочищенные экстракты разделяются на различные отдельные фракции, содержащие соединения сходной полярности или молекулярного размера. колоночная хроматография. В этом хроматографическом разделении примерно Было собрано 65 фракций объемом 20 мл каждая. (на основе времени) коллектор фракций ОМНИКОЛЛ.

Тонкослойная хроматография (ТСХ)

Аликвоту всех собранных фракций наносили на пластины для тонкослойной хроматографии с активированным силикагелем (20 х 20 см). Фракции объединяли на основе... характер пятен и значения Rf на пластине ТСХ. Объединенные фракции были пронумерованы (Fr.1 - Fr.8).

Препаративная ТСХ или ВЭЖХ колоночная хроматография

Фракции (Fr.1 - Fr.8) могут быть дополнительно очищены путем препаративная ТСХ и/или ВЭЖХ колоночная хроматография. Препаративная ВЭЖХ поможет более точно выделить конкретное соединение.

Характеристика аллелопатических соединений

Выделенные чистые фракции затем используются для определения структуры, а также для повторной проверки биологической активности.

Характеристика чистых аллелопатических соединений проводится с помощью методов высокого разрешения. ИК, МС, ¹Рука ¹³ЯМР 13C спектры.

ИК-спектры используются для определения функциональных групп выделенной чистой фракции. ЖХ-МС позволяет определить эмпирическую или точную (ВРМС) молекулярную массу, а спектры ЯМР показывают окружение атомов углерода и водорода. Анализ ЖХ-МС помогает сравнить масс-спектры.