タンパク質精製：液体クロマトグラフィーおよびグラジエント溶出

OMNICOLL分画コレクターとLAMBDA蠕動ポンプを使用

のために タンパク質精製 そして ペプチド、核酸、または小分子の単離 発酵液の粗混合物から、, 液体 カラムクロマトグラフィー（LC）は広く使用されている 下流工程（DSP）において、イオン交換、疎水性相互作用、親和性、またはサイズ排除を利用する。.

するために 液体クロマトグラフィープロセスを最適化する, OMNICOLL分画コレクターと信頼性の高いLAMBDA蠕動式液体ポンプは、実験室での実務において成功裏に使用されています。

自動分数収集の設定例

例えば、完全な 自動収集機能を備えたカラムクロマトグラフィー装置 OMNICOLL分画コレクターを用いた溶出液の分析には以下が含まれる：

濃度勾配溶出によるタンパク質精製のためのLAMBDA OMNICOLL分画コレクターおよびLAMBDA蠕動ポンプ

  • 2つの類似した容器 溶出バッファーAとBはサイフォンで接続されている。 （または、底部に流量を調整するためのバルブが付いたチューブ）
  • 溶出バッファーA 一貫してビーカーに吸い込まれる 溶出バッファーB 常に マグネチックスターラーで混合, それによって 緩衝液濃度を変化させる
  • プログラム可能なLAMBDA蠕動ポンプ 勾配混合液をポンプで送液する 列へ
  • カラムからの溶出液 通過している 検出器 （pH、280nmにおける吸光度、導電率を測定するため）
  • 検出器から、 タンパク質分画 収集される オムニコル分画収集剤 目的の容器（例：試験管、バイアルなど）に移す。

タンパク質は緩衝液の組成を変えることによって溶出される。 （イオン強度、pH、導電率、塩濃度など）. 溶出条件は、直線、段階的、またはセグメント化された段階的溶出から変更できます。 バッファーAからBへの流れを変更する 移動相の組成が時間とともに変化する。.

手順

液体カラムクロマトグラフィーでは、カラムに均一に充填することが重要です。 固定相に気泡、チャネル、亀裂がない.

LAMBDA蠕動ポンプは 液体移動相を連続的に 充填クロマトグラフィーカラムに一定の 脈動のない再現性のある流量.

クロマトグラフィーカラムの上部にロードされた試料混合物は、固体固定相（樹脂）を通過することによって分離される。

発酵液の成分は固定相に異なる程度で吸着および脱着されるが、 移動相中の成分はゆっくりと 別 互いに離れる。.

移動相がカラムを流れ続けると、カラム流出液または溶出液は 分量ごとに収集 クロマトグラフィーカラムの下端 OMNICOLL分画収集器の助けを借りて .

カラムまたは 分数の分析 情報を提供します 目的タンパク質の濃度 例えばゲル電気泳動など、さらなる処理のために分画する。.

 

タンパク質精製のための溶出方法の最適化

酵素精製のための液体クロマトグラフィーにおいて、適切な溶出バッファーを選択することで、分離の質と分析時間を大幅に改善することができる。.

液体カラムクロマトグラフィーにおける等溶媒溶出

液体クロマトグラフィーでは、タンパク質は 溶媒組成は一定 （すなわち等溶媒溶出）：

  • サンプルがそれほど複雑ではなく、また、サンプルの成分の保持時間が類似していない場合。.

さらに、最も強く吸着したタンパク質の場合、一定の移動相組成での溶出は 溶出に非常に長い時間がかかる.

等濃度溶出には、緩衝液と蠕動ポンプが使用されます。.

グラジエント溶出法 - 複雑な混合物（生物学的サンプル）からのタンパク質の精製に用いる。

グラジエント溶出では、 移動相の変化 分離プロセス中に作用し、分析対象物の保持に影響を与える。.

勾配溶出法は、タンパク質精製において有利に用いられる。

  • 複雑な生物学的サンプル
  • M特性が既知の混合物
  • C保持時間が類似している成分

タンパク質の精製に液体カラムクロマトグラフィーでグラジエント溶出法を用いる場合、 保持時間を短縮できる。.

グラジエント溶出は、 2つのバッファ そして 蠕動ポンプ1台または2台。.

グラジエント溶出と溶出プロファイル

グラジエント溶出とは、試料分離中に移動相の組成を変化させることで、最短時間で最適な分離を実現することを意味する。.

溶離液の組成が異なると（グラジエント溶出）、保持係数、ひいては容量係数に影響が出る可能性がある。.

勾配プロファイル：

 

一般的には線形勾配が好まれます。 直線、セグメント、凸型、凹型の形状. 非線形勾配は、分離時間の短縮、サンプル分解能の向上、検出感度の向上など、いくつかの明確な利点をもたらします。.

生化学者は、 ラムダ蠕動式液体ポンプ 移動相の脈動のない適用を保証するもの： www.lambda-instruments.com/peristaltic-pumps/.

信頼性の高い蠕動ポンプによる勾配生成

LAMBDAラボの蠕動ポンプはプログラム可能で遠隔制御が可能で、 直線状、段階的、およびセグメント化された勾配溶出.

1台のポンプによるグラジエント溶出

グラジエント溶出は、1台の蠕動ポンプでも実行できます。容器には 溶出バッファーAおよびB は サイフォンで接続されている または底部に流量を調整するためのバルブが付いたチューブ

  1. 溶出バッファーAは、溶出バッファーBが入ったよく撹拌されたビーカーに一貫して吸い込まれ、 緩衝液濃度が変化する

  2. プログラム可能なLAMBDA蠕動ポンプは、 勾配混合液をポンプで送液する クロマトグラフィーカラムへ

  3. カラムからの溶出液は検出器を通過し、pH、280 nmの吸光度、および導電率が測定された。

  4. 検出器から、 溶出液分画を収集 OMNICOLL分画収集器を用いて所望の容器へ分画する。 （例：ボトル、ビーカー、試験管、バイアルなど）

2台のポンプを用いたグラジエント溶出

プログラム可能なLAMBDA蠕動ポンプ2台 これらは、グラジエント溶出のための溶出液を再現性よく混合するために使用されます。.

  1. の 時間の経過に伴う組成の変化 できる プログラムされた LAMBDA蠕動ポンプのディスプレイに直接表示することも、PNet PC制御ソフトウェアを使用してリアルタイムグラフとして記録・表示することもできます。.

  2. の グラジエント混合物がクロマトグラフィーカラムを通過する そして、構成要素は分離される。.

  3. カラムからの溶出液は検出器を通過して測定され、 pH、280 nmの吸光度、および導電率.

  4. 自動分画収集装置 LAMBDA OMNICOLL、, 溶出液を分画する そして、プログラムされた時間または滴数カウンターに基づいて、分数を収集します。.

 

カラムクロマトグラフィー用ポンプシステムの要件

カラムクロマトグラフィー用ポンプシステムの最も重要な要件は以下のとおりです。

  • 一定かつ再現性のある流量
    再現性はピークの保持時間に依存する。保持時間は流量に依存する。.

  • 脈動のない流れ
    定常相は圧力サージから保護されなければならない。検出器のベースラインは安定した状態を維持する必要がある。.

 

5年間の保証が付いたLAMBDA MULTIFLOWプログラマブル蠕動ポンプは、再現性のある流量を実現するために推奨されます。.

LAMBDA社製プログラマブル実験室用蠕動ポンプ

タンパク質精製のための分画の要件

液体カラムクロマトグラフィー用分画収集装置の最も重要な要件は以下のとおりです。

  • 無制限の収容人数
    特にプロセス最適化の際には、無制限の数の分画を収集できる可能性が極めて重要となる。.

  • 異なる音量範囲
    分画収集装置を様々な実験室実験やパイロットスケールプロセスに合わせて調整できるようにするため。.

 

カスタマイズ可能な分画収集装置OMNICOLLは、実験室規模およびパイロット規模での効率的なプロセス最適化に最適です。.