단백질 정제: 액체 크로마토그래피 및 기울기 용리법

OMNICOLL 분획 수집기와 LAMBDA 연동 펌프를 사용

을 위한 단백질 정제 그리고 펩타이드, 핵산 또는 소분자의 분리 발효액의 조악한 혼합물로부터, 액체 컬럼 크로마토그래피(LC)는 널리 사용됩니다. 다운스트림 공정(DSP)에서 이온 교환, 소수성 상호작용, 친화성 또는 크기 배제를 이용합니다.

하기 위해 액체 크로마토그래피 공정을 최적화합니다., OMNICOLL 분획 수집기와 신뢰할 수 있는 LAMBDA 연동식 액체 펌프는 실험실에서 성공적으로 사용되고 있습니다.

자동 분수 수집 설정 예시

예를 들어, 완전한 자동 수집 기능을 갖춘 컬럼 크로마토그래피 장치 OMNICOLL 분획 수집기를 사용한 용출액에는 다음이 포함됩니다.

농도 구배 용출을 이용한 단백질 정제를 위한 LAMBDA OMNICOLL 분획 수집기 및 LAMBDA 연동 펌프

  • 두 개의 유사한 용기 용출 완충액 A와 B가 사이펀으로 연결되어 있음 (또는 유량을 조절할 수 있는 밸브가 달린 아래쪽 튜브)
  • 용출 완충액 A 지속적으로 비커 안으로 빨려 들어간다 용출 완충액 B 끊임없이 자석 교반기로 혼합, 따라서 완충액 농도를 변경하여
  • 프로그래밍 가능한 람다 연동 펌프 그라디언트 혼합물을 펌핑합니다. 컬럼 안으로
  • 컬럼에서 용출된 용액 통과되고 있습니다 탐지기 (pH, 280nm 흡광도, 전도도를 측정하기 위해)
  • 검출기에서 단백질 분획 수집됨 옴니콜 분획 수집기 원하는 용기(예: 튜브, 바이알 등)에 담습니다.

완충액의 조성을 변경함으로써 단백질을 용출시킨다. (이온 강도, pH, 전도도, 염 농도 등). 용출 조건은 선형, 단계적 또는 분할 단계적 방식으로 변경할 수 있습니다. 버퍼 A에서 B로의 흐름을 변경 시간에 따라 이동상 구성이 변화하는 경우.

절차

액체 컬럼 크로마토그래피에서는 컬럼을 고르게 충전하는 것이 중요합니다. 고정상에 기포, 통로 및 균열이 없음.

람다 연동 펌프는 다음을 공급합니다. 액체 이동상 연속적으로 일정한 압력으로 충전 크로마토그래피 컬럼에 주입 맥동 없는 재현 가능한 유량.

크로마토그래피 컬럼 상단에 주입된 시료 혼합물은 고체 고정상(수지)을 통과하면서 분리됩니다.

발효액의 구성 성분들은 고정상에 서로 다른 정도로 흡착 및 탈착되는 반면, 이동상 내의 성분들이 천천히 분리된 서로에게서.

이동상이 컬럼을 통해 계속 흐르면서 컬럼 유출액 또는 용출액이 생성됩니다. 분획으로 수집됨 크로마토그래피 컬럼의 하단에서 OMNICOLL 분획 수집기의 도움으로 .

컬럼 또는 용기에서 단백질 용출을 지속적으로 모니터링하는 검출기 분획 분석 ~에 대한 정보를 제공합니다 원하는 단백질의 농도 예를 들어 겔 전기영동과 같은 추가 처리를 위해 분획합니다.

 


단백질 정제를 위한 용출 방법 최적화

효소 정제를 위한 액체 크로마토그래피에서 적절한 용출 완충액을 선택하면 분리 품질과 분석 시간을 크게 향상시킬 수 있습니다.

액체 컬럼 크로마토그래피에서의 등용매 용리

액체 크로마토그래피에서 단백질은 다음과 같은 조건에서 분리됩니다. 일정한 용매 조성 (즉, 등용매 용리):

  • 시료가 그다지 복잡하지 않고, 시료 구성 성분들의 유지 시간이 유사하지 않을 때.

게다가, 가장 단단하게 흡착된 단백질의 경우, 일정한 이동상 조성으로 용출하면 용출되는 데 매우 오랜 시간이 걸립니다.

완충액과 연동 펌프는 등용매 용출에 사용됩니다.

경사 용리법 - 복잡한 혼합물(생물학적 시료)에서 단백질을 정제하는 데 사용

경사 용리에서, 구성 성분은 이동상 변화 분리 과정 중에 발생하며 분석 대상 물질의 유지 시간에 영향을 미칩니다.

기울기 용리법은 단백질 정제에 유리하게 사용됩니다.

  • 복잡한 생물학적 샘플
  • M알려진 속성을 가진 혼합물
  • C유사한 유지 시간을 가진 성분들

액체 컬럼 크로마토그래피에서 단백질 정제를 위해 기울기 용리법을 사용하는 경우, 보존 기간을 단축할 수 있습니다.

경사 용리법은 다음과 같이 수행됩니다. 두 개의 버퍼 그리고 연동 펌프 1개 또는 2개.

경사 용리 및 용리 프로파일

경사 용리법은 최적의 분리를 최소 시간 내에 달성하기 위해 시료 분리 과정 동안 이동상 조성을 변화시키는 것을 의미합니다.

용리액의 조성 변화(경사 용리)를 통해 유지 인자, 따라서 용량 인자에 영향을 줄 수 있습니다.

그라디언트 프로필:

 

일반적으로 선형 기울기가 선호되며, 이는 다음과 같이 구현할 수 있습니다. 선형, 분할형, 볼록형 및 오목형 모양. 비선형 기울기는 분리 시간 단축, 시료 분해능 향상, 검출 감도 향상 등 여러 가지 뚜렷한 이점을 제공합니다.

생화학자들은 다음과 같이 권장합니다. 람다 연동식 액체 펌프 이는 이동상이 맥동 없이 적용되도록 보장합니다. www.lambda-instruments.com/peristaltic-pumps/.

신뢰할 수 있는 연동 펌프를 이용한 경사도 생성

LAMBDA 연구실 연동 펌프는 프로그래밍 및 원격 제어가 가능하여 다음과 같은 목표를 달성할 수 있습니다. 선형, 단계적 및 분할형 기울기 용리.

하나의 펌프를 이용한 경사 용리

경사 용출은 연동 펌프 하나로도 수행할 수 있습니다. 용기는 다음과 같습니다. 용출 완충액 A 및 B ~이다 사이펀으로 연결됨 또는 유량을 조절할 수 있는 밸브가 달린 아래쪽 튜브

  1. 용출 완충액 A는 용출 완충액 B와 함께 잘 저어진 비커로 지속적으로 유입됩니다. 완충액 농도가 변경됨

  2. 프로그래밍 가능한 람다 연동 펌프는 다음과 같은 용도로 사용됩니다. 그라디언트 혼합물을 펌핑합니다. 크로마토그래피 컬럼 안으로

  3. 컬럼에서 용출된 용액은 검출기를 통과하여 pH, 280nm에서의 흡광도 및 전도도를 측정했습니다.

  4. 검출기에서 용출액 분획 수집 OMNICOLL 분획 수집기를 사용하여 원하는 용기에 담습니다. (예: 병, 비커, 튜브, 바이알 등)

두 개의 펌프를 이용한 경사 용리

프로그래밍 가능한 람다 연동 펌프 2개 이는 기울기 용리에서 용리액의 재현성 있는 혼합을 위해 사용됩니다.

  1. 그만큼 시간에 따른 구성 변화 가능하다 프로그래밍된 LAMBDA 연동 펌프 디스플레이에 직접 표시하거나 PNet PC 제어 소프트웨어를 사용하여 실시간 그래프로 기록 및 표시할 수 있습니다.

  2. 그만큼 기울기 혼합물이 크로마토그래피 컬럼을 통과합니다. 그리고 구성 요소들이 분리됩니다.

  3. 컬럼에서 용출된 용액은 검출기를 통과하여 측정되었습니다. pH, 280nm 흡광도 및 전도도.

  4. 자동 분획 수집기 LAMBDA OMNICOLL, 용출액을 분획합니다 그리고 설정된 시간 또는 드롭 카운터에 따라 분수를 수집합니다.


 

컬럼 크로마토그래피용 펌핑 시스템의 요구 사항

컬럼 크로마토그래피용 펌핑 시스템의 가장 중요한 요구 사항은 다음과 같습니다.

  • 일정하고 재현 가능한 유량
    재현성은 피크의 유지 시간에 따라 달라집니다. 유지 시간은 유속에 따라 달라집니다.

  • 맥동 없는 흐름
    정지상은 압력 급증으로부터 보호되어야 합니다. 검출기의 기준선은 안정적으로 유지되어야 합니다.

 

5년 보증이 제공되는 람다 멀티플로우 프로그래밍 가능 연동 펌프는 재현 가능한 유량을 얻는 데 권장됩니다.

람다 프로그래밍 가능 실험실 연동 펌프

단백질 정제를 위한 분획의 요구 사항

액체 컬럼 크로마토그래피용 분획 수집기의 가장 중요한 요구 사항은 다음과 같습니다.

  • 무제한 용량
    무제한으로 분획물을 수집할 수 있다는 점은 특히 공정 최적화 과정에서 매우 중요합니다.

  • 다른 음량 범위
    다양한 실험실 실험 및 파일럿 규모 공정에 맞게 분획 수집기를 조정할 수 있도록 하기 위함입니다.

 

맞춤형 분획 수집기인 OMNICOLL은 실험실 및 파일럿 규모에서 효율적인 공정 최적화에 이상적입니다.