蛋白质纯化：液相色谱和梯度洗脱

为了 蛋白质纯化 和 肽、核酸或小分子的分离 从粗发酵液混合物中，, 液体 柱色谱法（LC）被广泛应用。 下游加工（DSP）中采用离子交换、疏水相互作用、亲和力或尺寸排阻。.

为了 优化液相色谱过程, OMNICOLL馏分收集器和可靠的LAMBDA蠕动式液体泵已成功应用于实验室实践中：

自动分数收集示例设置

例如，一个完整的 带有自动收集装置的柱色谱装置 使用 OMNICOLL 馏分收集器收集的洗脱液包括：

• 两个类似的容器 洗脱缓冲液 A 和 B 通过虹吸管连接 （或者底部装有带阀门的管子，用于调节流量）
• 洗脱缓冲液 A 不断地被吸入烧杯中 洗脱缓冲液 B 它不断地 用磁力搅拌器搅拌, 由此 改变其缓冲液浓度
• 可编程LAMBDA蠕动泵 泵送梯度混合物 进入列
• 从柱中洗脱液 正在通过 探测器 （用于测量pH值、280纳米吸光度、电导率）
• 来自探测器 蛋白质分级分离 由……收集 OMNICOL 馏分收集器 将溶液分装到所需的容器中（例如：试管、小瓶等）。

通过改变缓冲液的组成来洗脱蛋白质。 （离子强度、pH值、电导率、盐浓度等）. 洗脱条件可以通过以下方式从线性、阶梯式或分段阶梯式改变： 将缓冲液A的流量改为B 其中流动相组成随时间发生变化。.

程序

在液相色谱柱色谱中，均匀填充色谱柱至关重要。 固定相上无气泡、通道和裂纹.

LAMBDA蠕动泵供血 液态流动相连续 在恒定条件下，将填料色谱柱注入到填充色谱柱中。 无脉动可重复流速.

将样品混合物加载到色谱柱顶部，通过固体固定相（树脂）进行分离：

发酵液中的成分在固定相上的吸附和解吸程度各不相同， 流动相中的组分缓慢 分离 彼此之间。.

当流动相持续流经色谱柱时，色谱柱流出物或洗脱液就会产生。 收集成分数 在色谱柱的下端 借助 OMNICOLL 馏分收集器 .

用于连续监测蛋白质从色谱柱洗脱的检测器或 各组分的分析 提供有关以下方面的信息 所需蛋白质的浓度 分离成若干组分，以便进一步加工，例如：通过凝胶电泳。.

蛋白质纯化洗脱方法的优化

在液相色谱法纯化酶的过程中，选择合适的洗脱缓冲液可以显著提高分离质量和分析时间。.

梯度洗脱和洗脱曲线

梯度洗脱是指在样品分离过程中改变流动相组成，以在最短时间内实现最佳分离。.

通过改变洗脱液的组成（梯度洗脱），可以影响保留因子，从而影响容量因子。.

梯度分布图：

线性梯度通常是首选；它可以在以下情况下实现： 线形、分段形、凸形和凹形. 非线性梯度具有几个明显的优势，包括缩短分离时间、提高样品分辨率和提高检测灵敏度。.

利用可靠的蠕动泵产生梯度

LAMBDA实验室蠕动泵可编程且可远程控制，以实现 线性、阶梯式和分段式梯度洗脱.

柱色谱泵送系统最重要的要求是：

• 恒定且可重复的流速
  重现性取决于峰的保留时间。保留时间又取决于流速。.

• 无脉动流
  必须保护静止相免受压力冲击。检测器的基线应保持稳定。.

建议使用 LAMBDA MULTIFLOW 可编程蠕动泵，该泵享有 5 年保修期，可实现可重复的流速。.

蛋白质纯化所需组分

液相色谱馏分收集器最重要的要求是：

• 不受限制的容量
  能够收集无限数量的分数是非常重要的，尤其是在工艺优化过程中。.

• 不同音量范围
  能够使馏分收集器适应各种实验室实验和中试规模工艺。.

可定制馏分收集器 OMNICOLL 是实验室和中试规模高效工艺优化的理想选择。.